相对分子质量校正曲线标准品可通过体积排阻色谱法,绘制小分子蛋白或者多肽类样品的(如胶原蛋白肽,低聚肽粉,胶原三肽)相对分子质量校正曲线。通过这个方法,可以建立一种能有效测定多肽相对分子质量的方法。相对分子质量校正曲线标准品一般包括五种物质,分别是:甘氨*-甘氨*-甘氨*标准品,相对分子质量189;甘氨*-甘氨*-酪氨*-精氨*标准品,相对分子质量451;杆菌酶标准品,相对分子质量1411;抑肽*标准品,相对分子质量6511;细胞色素*标准品,相对分子质量12311。
测定相对分子质量的方法有多种,如超滤法、凝胶电泳法、体积排阻色谱法、质谱法等。其中超滤法只能较为粗略地测定相对分子质量分布,在分离纯化部分应用较多;凝胶电泳法存在操作繁琐、重现性差的缺点,且对小肽的相对分子质量测定有很大的局限性,适用于蛋白质、多肽相对子质量分布研究的初期阶段;质谱法能较为精确地测定分子质量分布,但设备昂贵,不宜做常规分析手段;体积排阻色谱法具有操作简便快速、重复性好、精确度高的特点,已广泛应用于多肽、蛋白等大分子物质的相对分子质量及其分布的测定。
体积排阻色谱法是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质,对于某种型号的凝胶,一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而被排阻在外,只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外;而一些小分子不被排阻,可自由扩散,渗透进入凝胶内部的筛孔,然后又被流出的洗脱液带走。分子越小,进入凝胶内部越深,所走的路程越多,故小分子最后流出柱外,而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间,只能进入一部分凝胶较大的孔隙,亦即部分排阻,因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。因此,样品经过凝胶层析后,分子便按照从大到小的顺序依次流出,达到分离的目的。
相对分子质量校正曲线标准品在国标中也有广泛应用,
比如:GB 31645-2018 胶原蛋白肽
GB/T 22729-2008 海洋鱼低聚肽粉
QB/T 4707-2014 玉米低聚肽粉
QB/T 5298-2018 小麦低聚肽粉
T/SNHFA 013-2021 海参低聚肽粉
综上,相对分子质量校正曲线标准品可以简便快速的测定多肽、蛋白等大分子物质的相对分子质量及其分布。
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